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Bst DNA聚合酶介绍


Bst DNA 聚合酶(Large Fragment)
內容物 Bst DNA 聚合酶(Large Fragment) 保存溫? -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ Cat. Number C040-1 C040-5 C041-1 C041-5 規格 2U/ul, 250 ul X5 1ml/vial X5 定價 499 1999 49 199

10X Bst buffer

☆ 產品特色︰
Bst DNA 聚 合 酶 , 乃 是 將 Bacillus



Bst DNA聚合酶單位定義︰
中可將 10nmole 的 dNTP 結合至 DNA 片段上所需要 的?。

1. 1 個活性單位:在 65°C,30 分鐘內於下述反應條件

stearothermophilus中的聚合酶基因,保?? 5’?3’聚
合酶(pol)的片段,但是去除 5’?3’外?酶(exo)基因片段 而成的Large Fragment。本酵素最主要的特性是具有超 強的股取代能?(strand displacement) ,因此在?具 有 5’?3’外?酶活性的情況下,因阻礙到前端聚合反應 而被取代釋出的一股並?會被水解。這種被釋出的單股 DNA具有可被專一性引子(primer)辨?與做為模板的功 能 , 因 此 許 多 恆 溫 增 幅 的 反 應 , 包 含 LAMP ( Loop-mediated isothermal amplification) b與 RCA (Rolling Circle Amplification)c反應,?是?用這種原 ?而設計,也因此Bst DNA聚合酶自然就成為這?型反 應中酵素的首選。
a

2. 反應條件: 50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (pH 8.8), 10mM MgCl2, 30 nM M13mp18 SS DNA, 70nM M13 sequencing primer, 200 uM dATP, 200 uM dCTP, 200 uM dGTP, 100uM 3H dTTP 與 100 ug/ml BSA,總反應體積為 50 ul。



Bst DNA聚合酶熱失活條件︰
80℃加熱10分鐘。

☆ 小米貼心叮嚀: ☆ 10X Bst buffer 的組成︰
200 mM Tris-HCl (pH8.8 @25 ℃ ) , 100 mM (NH4)2SO4,100 mM KCl,20mM MgSO4,1%(v/v) Triton X-100。 1. 除?Bst DNA聚合酶Large Fragment適用於恆溫增 幅反應之外,其他具有股取代能?並且缺乏 5’?3’ 外 ? 酶 活 性 的 DNA 聚 合 酶 , ? 如 φ 29 DNA polymerased、Vent DNA polymerase、PRD1 DNA polymerase、甚至於DNA polymerase I (Klenow fragment)?有被報導使用在恆溫增幅反應上。

☆ 酵素保存條件:
10 mM Tris-HCl (pH 7.5 @25℃),50 mM KCl, 1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% (v/v) glycerol, 0.1% (v/v) Triton X-100。

2. 因 為 Bst DNA 聚 合 酶 的 最 佳 活 性 溫 ? 範 圍 (60-65℃),也正好是一般 oligo 具有足夠專一性 與 anneal 能?的溫?範圍,因此 Bst DNA 聚合 酶是目前可用於恆溫增幅反應中最好用的酵素 之一。 3. 小米提醒你, Bst DNA 聚合酶的活性

☆ ?考文獻:
a. Akihiro Yoshida, Shiori Nagashima, Toshihiro Ansai, Masayo Tachibana, Hiroaki Kato, Hajime Watari, Tsugunori Notomi and Tadamichi Takehara. “Loop-mediated

isothermal amplification method for rapid detection of the periodontopathic bacteria

與股取代能?,可能會受到二價陽?子濃?(如 鎂 ?子) 影響 ,雖然小米 所提供 的 10X Bst buffer 中添有 20 mM Mg2+ (最終濃?為 2 mM),如果反應須要用到較高濃?的鎂?子, 則可外加MgSO4至最終濃? 3~4 mM即可。因為 小米的 buffer 與酵素是分開?賣的,同時 Bst DNA 聚合酶隨著用途的?同可能會有?同的反 應條件。如果你已經有?最適當的buffer,就? 需要再買小米的buffer?,環保又?錢。 4. 除??子濃?的調整之外,小米建議你可以嘗 試一些添加劑?促進 DNA 聚合酶的股取代能 ?,目前在恆溫增幅反應中常用的添加劑有 Betaine 、 DMSO 、 gelatin 、 single-stranded binding protein (SSB)及 RecA。 5. 小米提醒你, Bst DNA 聚合酶的活性會 c. b.

Porphyromonas

gingivalis,

Tannerella

forsythia and Treponema denticola”. JCM, May 2005, p. 2418-2424, Vol. 43, No. 5. Motoko Fujino, Naolo Yoshida, Shinya Yamaguchi, Norimitsu Hosaka, Yoshinori Ota, Tsugunori Notomi, Tetsuo Nakayama. ”A simple method for the detection of measles virus genome by loop-mediated isothermal amplification”. J. Medical Virology, May 2005, p.406-413, Vol. 76, Issue 3. Bin Wang, Simon J. Potter, Yiguang Lin, Anthony L. Cunningham, Dominic E. Dwyer, Yuelong Su, Xuejun Ma, Yunde Hou and Nitin K. Saksena. “Rapid and sensitive detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus by rolling circle amplification”. JCM, May 2005, p. 2339-2344, Vol. 43, No. 5. d. Irina V. Smolina, Dmitry I. Cherny, Raymond M. Nietupski, Thomas Beals, James H. Smith, David J. Lane, Natalia E. Broude. labeled 2005 “High-density Analytical fluorescently March

隨著溫?的變化而有所?同,其活性與反應溫? 的關係如下: 溫? 37℃ 50℃ 60℃ ~ 65℃ >70℃ 6. 小米小撇步:在抓 酵素活性比? <15% ~40% ~100% 酵素失去活性

rolling-circle amplicons for DNA diagnostics”. Biochemistry. p.152-155, Vol. 347.

Bst DNA 聚合酶最佳

反應條件的時候,往往會發現有時少加些酵素結 果反而會比較好哦。因此小米提醒你,當發現照 著 paper 的條件而做?出?的時候先?要氣餒, 此時?妨先向上及向下測試幾個?同的酵素濃 ?,可能就能解決你的問題囉!


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