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实验一 徒手切片的制作


实验须知
1.遵守实验室制度,维护实验室安全,不违章操作,严防爆炸、着火、中毒、 触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。

2.实验前作好预习,明确实验内容,了解实验的基本原理和方法,安排好当天 计划,争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯——实验中应如实记 录原始数据和实验现象,并严格遵守实验规则。 3.实验室中保持安静,不许大

声喧嚷,不许抽烟、不迟到、不随便离开,实验 台面应保持清洁,使用过的仪器应及时清洗干净,存放在实验柜内,废弃的 固体和滤纸等丢入废物缸内,绝不能丢入水槽、下水道和窗外,以免堵塞和 影响环境卫生。 4.公用仪器及药品用完后立即返还原处,破损仪器应填写破损报告单,注明原 因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。
5.保持实验室内整洁,学生采取轮流值日,每次实验完毕,负责整理公用仪器, 将实验台、地面打扫干净,倒清废物缸,检查水、电和门窗是否关闭。

实验分组
每个桌面坐7个人,2或3个人为一小组, 7个人为一大组。

实验报告要求
1、实验前认真预习实验内容,毋须写预习报 告,合理安排好实验时间。 2、实验完成后,根据实验内容写一份真实的 实验报告。下一次实验时以班级为单位上 交上一次的实验报告。 3、请假者,请及时上交实验报告。

徒手切片的制作
医学与生命科学学院

?

徒手切片法

用手直接拿刀片把植物新鲜材 料切成薄片,所作的切片通常不经 染色或经简单染色后,制成临时的 水装片用于观察,亦可以通过脱水 与染色制成永久制片。

?优点
简单、方便;不需要复杂设备;不经化学 药物处理,基本上保留了植物活体的状态。

?局限性
难以把过硬或者过软的材料制成薄片,对需 制作连续切片且厚度要求在几微米时该法 更无能为力。

徒手切片的制作
一、实验材料及器材的准备 二、实验材料的处理 三、握夹持物和持刀 四、切片 五、制片 六、注意事项

实验器材的准备
1、锋利的刀片 2、洁净的载玻片、盖玻片 3、盛清水的培养皿 4、毛笔、镊子等

实验材料的处理
1、软硬适中、便于手持的材料,一般截成小 块(长2~3cm,切片断面不超过3~5 mm2)。 2、过于柔嫩的器官,可选用胡萝卜根或土豆 块茎作为夹持物。夹持物截成规范的小块,再 用刀从一端的中线纵向劈开(不要劈到底), 以夹住材料。 如新鲜叶片,切去叶柄、叶尖和叶缘后,切 成长度和宽度都小于夹持物劈缝的长方块,再 放入夹持物劈缝中。 3、有些叶片可以卷成圆筒再进行切片。

握夹持物和持刀

用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片 的夹持物,并使其劈缝与自己本身平行, 拇指要稍低于食指,以免被刀割破。夹 持物上端要略高于手指,但勿过高,以 防切割时夹持物和刀摇动。 右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指 上,与材料切面平行。





这是切片的关键阶段。 沾水的刀口保持水平对着夹持物,自 左前方向右后方,以均匀、快捷的动作, 斜着向后进行连续拉切。切时用臂力而 不用腕力。如此循环多次,切下许多薄 片后,把切下的薄片,迅速用毛笔刷入 清水中备用。

选 片
用毛笔挑选透明的薄片,制临时 装片。

临时装片技术
首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净,拭擦玻 片动作要轻,手指用力要均匀,否则易拭破。在载玻 片中央,滴加一、二滴清水,然后用毛笔取培养皿中 切好的材料置于载玻片上,将盖玻片轻轻盖上,盖盖 玻片时,用镊子夹起盖玻片,使载玻片一边先放下, 接触一边水,然后再轻轻放平,以免水中产生气泡, 影响观察。如仍有气泡,可用镊子轻轻加压盖玻片, 将气泡赶出。如水分过多,可用滤纸条将水吸干,如 水分不足,可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料 浸没水中,盖玻片紧贴载玻片,这样装片制成。

将切下的薄片放在载玻片上时,要 先在玻片中央加一滴水,把材料放到水 滴中,然后用镊子夹住盖玻片,将盖片 的一侧先接触到载玻片中央的水滴,然 后用镊子顶住盖片的另一侧,慢慢放下, 使盖玻片与载玻片之间充满水,如有气 泡,要掀起盖片,重新放置。

? 徒手制作的切片可以直接在光镜下观察,

也可以经过简易的组织化学染色, 以使结构看得更清楚,同时可观察到细 胞各部分的化学成分。 ? 染色的方法是将切片放在载玻片上后, 用吸水纸吸去多余的水分,滴上一滴染 料,经过1~2min后,用水冲洗一下,盖 上盖玻片,在显微镜下观察。

临时装片制作步骤
1.取材 选取待观察的植物材料初步切取大约3cm长的小块再依切 片的具体要求,将组织块修整为0.5cm的材料块。 2.切片 以左手夹住材料,用右手平稳地握住刀片。切片时,使刀 片与材料的断面保持平行,刀口自左上方斜向右下方,动作要 均匀有力。材料与刀片须常以水湿润。切下的薄片立即用毛笔 蘸水后粘取移入盛有清水的培养皿内。 3.选片 切片完整,在培养皿中选择薄而均匀且切面完整的组织切 片,捞在载玻片上作临时水装片,然后置于显微镜下观察,如 结构能被清晰地显示出来,则可制成永久保存封片。

注意事项
1、在切片前,要不断地用水湿润材料和刀片。 2、夹持物上端要保持表面平整。

3、切片时,双手应该保持活动状态,不要使它们紧靠身
体或实验台。

4、用力不要过猛,不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
5、动作要敏捷,材料要一次切下,不要追求切片形状的

完整。速度要快,才能切得又薄又平。


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